Ítem
Acceso Abierto
Estandarización del proceso de aislamiento de vesículas extracelulares en células de cáncer de mama triple negativo
Título de la revista
Autores
Rodríguez, Juan Felipe
Archivos
Fecha
2022-08-09
Directores
Martínez Agüero, Magdalena María
Rincón Riveros, Andrés
ISSN de la revista
Título del volumen
Editor
Universidad del Rosario
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Resumen
Las vesículas extracelulares (EV) son estructuras delimitadas por una membrana lipídica que son secretadas por casi todos los tipos de células al espacio extracelular. Están involucradas en diferentes procesos de comunicación celular; particularmente, se ha identificado que las EV derivadas de células cancerosas desempeñan un papel importante en la modificación del microambiente tumoral ya que tienen la capacidad de transportar diferentes tipos de biomoléculas como proteínas y tipos de RNA, que actúan como reguladores en el ciclo celular. Estas características permiten el uso de EV como biomarcadores para el diagnóstico y seguimiento de diferentes patologías, entre ellas el cáncer de seno, así como su uso en terapias dirigidas. El objetivo de este estudio consistió en estandarizar una metodología para el aislamiento de EV presentes en el medio sobrenadante de cultivo de dos líneas celulares de cáncer de mama, así como su caracterización mediante el uso de técnicas basadas en anticuerpos. Los resultados muestran que las vesículas producidas por las células, tanto en cáncer luminal A como en triple negativo, tienen micro RNA (miRNA), por lo que se constituyen efectivamente en una herramienta para diagnóstico y seguimiento de la enfermedad. Finalmente, este estudio permitió el aislamiento de EV a partir de cultivo celular comprobando la eficiencia de las columnas SEC qEV2 de IZON en laboratorios ubicados sobre los 2000 m.s.n.m y eliminando la contaminación por EV provenientes del suero fetal bovino (SFB) sin afectar significativamente la viabilidad del cultivo celular usando medio de cultivo sin suplementar
Abstract
Extracellular vesicles (EVs) are lipid membrane-bound structures that are secreted by almost all cell types into the extracellular space. They are involved in different cell communication processes; particularly, it has been identified that EVs derived from cancer cells play an important role in modifying the tumor microenvironment since they have the capacity to transport different types of biomolecules, such as proteins and types of RNA, which act as regulators in the cell cycle. These characteristics allow the use of EVs as biomarkers for the diagnosis and monitoring of different 4 pathologies, including breast cancer, as well as their use in targeted therapies. The principal aim of this study was to standardize a methodology for the isolation of EVs present in the culture supernatant of two breast cancer cell lines, as well as their characterization using antibody-based techniques. The results show that the vesicles produced by the cells, both in luminal A cancer and in triple negative cancer, have micro-RNA (miRNA), for which they effectively constitute a tool for diagnosis and monitoring of the disease. Finally, this study allowed the isolation of EVs from cell culture, proving the efficiency of IZON qEV2 SEC columns in laboratories located above 2000 m.a.s.l. and eliminating EV contamination from fetal bovine serum (FBS) without significant effect on the cell culture viability using unsupplemented culture medium
Palabras clave
Vesículas extracelulares , Cáncer de mama , Biomarcadores , Micro RNA
Keywords
Extracellular vesicles , Breast cancer , Biomarkers , MicroRNA
